Methodischer Hintergrund
des Cell Cycle Profiling

Ausgehend von einer kleinen Tumorbiopsie (≥27mm³) wird durch Homogenisierung ein Zelllysat zubereitet . Eine Hälfte des Lysats wird in einem speziellen Proteinchip, dem ImmobiChip, mit Hilfe von fluoreszenzmarkierten Antikörpern auf die Expressionsraten der CDKs hin analysiert .
Der zweite Teil des Lysats wird auf mit Antikörper beladene Minisäulen geladen . Die CDKs binden an die Antikörper und werden nach einigen Waschschritten mit einem enzym-spezifischen Substrat inkubiert. Durch die Phosphorylierung des Substrats mit fluoreszenzmarkierten Phosphatgruppen und dem Transfer des solchermaßen markierten Substrats auf den ImmobiChip werden die Aktivitätswerte der CDKs bestimmt .
Mit Hilfe einer einfach zu handhabenden Software werden aus den Expressions- und Aktivitätswerten die spezifischen Enzymaktivitäten der CDKs errechnet und normalisiert gegen Hintergrundkorrektur und Kontrollen.
Mit Hilfe eines spezifischen Algorithmus erhält der Kliniker ein Klassifizierungsresultat des jeweiligen Tumors in Hoch-, Mittel- oder Niedrig-Risiko bezüglich seines Rezidivpotentials, bzw. eine Aussage über eine zu erwartende Chemosensitivität .

CELL CYCLE PROFILING - PROTOKOLL