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OSNA - FAQ
(Preguntas frecuentes)

Preguntas sobre el método
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OSNA es la abreviatura de “one-step nucleic acid amplification”, que se traduce también como “amplificación de ácido nucleico de un solo paso”.
Se homogenizan los focos de los nódulos linfáticos y a continuación se amplifica la diana molecular, el ARNm de CK19, mediante el procedimiento RT-LAMP y se detecta por (“reverse-transcription-loop-mediated-isothermal-amplification”, es decir, amplificación isotérmica y transcripción inversa)
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LAMP es la abreviatura de “Loop-mediated Isothermal Amplification”. Es un método sencillo, rápido y específico para la amplificación de ácidos nucleicos que ha sido desarrollado por Eiken Chemical Co., Ltd. Se utilizan 6 cebadores diferentes, que reconocen determinadas regiones de la secuencia de la diana y se unen a ellas. LAMP utiliza una ADN-polimerasa con actividad de desplazamiento de cadena y funciona a una temperatura constante de aproximadamente 65°C. La amplificación y la detección de la secuencia Diana tiene lugar en un solo paso.
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Las ventajas de OSNA son:

  • No se tiene que purificar el ARN.
  • Cortos tiempos de reacción que permiten un empleo intraoperatorio del sistema.
  • Utilización de 6 cebadores que garantiza una alta especificidad de la reacción.
  • Un diseño de ensayo óptimo que impide la amplificación de pseudogenes de CK19.
  • La amplificación a una temperatura constante de 65°C impide la amplificación de ADN genómico:

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La reacción dura 16 minutos.
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El análisis dura, incluido el tratamiento previo, aproximadamente 30 minutos para un ganglio linfático y aproximadamente 40 minutos para cuatro nódulos linfáticos.
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Pueden ser analizados hasta 4 ganglios linfáticos en una carga.
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El lisado se puede conservar a -80°C o bien en nitrógeno líquido.
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La coloración azul que se utiliza para la identificación quirúrgica de los ganglios linfáticos centinela no afecta en absoluto a los resultados de OSNA.
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Preguntas sobre los reactivos
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Conserve el reactivo de homogenización (Lynorhag) a 4°C y el kit de amplificación (Lynoamp) a -20°C.
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Las soluciones se pueden descongelar y volver a congelar hasta cinco veces.
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El reactivo Lynoamp se puede conservar aproximadamente 6 horas en hielo o en el Sistema robótico RD100i.
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